BENZONASE- 苏州博特龙

饲养层细胞制备

于细胞融合前-，准备饲养层细胞，常选用小鼠腹腔渗出细胞，其中主要是巨噬细胞和淋巴细胞。应用腹腔渗出细胞的好处是: 一方面做饲养细胞，另一方面巨噬细胞可以吞噬死0亡的细胞和细胞碎片，为融合细胞的生长造成-的环境。腹腔细胞的数目应适宜，过少则不能提供杂交瘤细胞所需要的生长因子，过多会阻碍杂交瘤细胞的贴壁，一般以铺满孔底 30% 为好。

腹0水的纯化

采集复水后，12 000 r/min 离心 15 min，去掉 沉淀等杂质。往离心后的腹0水中加入等体积的 pbs，并添加-铵固体至 50% 饱和，静置 2 h，12 000 r/min离心15 min，弃 上 清，用 pbs 重 新 溶 解 沉 淀，然 后 再次加入-铵固体至 45% 饱和，静置两个小时左右，12 000 r/min 离心 15 min 弃去上清，用少量 pbs 溶解沉淀，即得到较纯的抗0体，对 pbs 透析除去-铵，透析时间为24 h，透析过程中更换透析液两至三次。

使用方法

1. 用生理盐水将抗原稀释到2倍zui终浓度按每针次50μl用量配制。
备注：使用的抗原用量为
1免0疫原性较弱的合成肽每针次10-100μg；
2亚单位蛋白抗原每针次1-10μg；
3免0疫原性较强的灭活病原微生物和-样颗粒抗原每针次1-10μg；
4肿0瘤细胞裂解物每针次10-100μg。

2. 37oc水浴中解冻佐剂，充分混匀，无菌条件下取出所需用量按每针次50μl与抗原按体积比1:1混匀。

3. 通过后腿小腿肌肉或腹0股0沟皮下0注射免0疫小鼠，每只小鼠注射100μl。

4. 第7天按同样方式加强免0疫1针。备注：每次免0疫佐剂和抗原现配现用

5. 第014天通过elispot、胞内细胞0因子染色、mhc四聚体染色或其他可行方法检测脾0脏或-淋巴0结中的抗原特-cd4+ th1和/或cd8+ ctl反应。

1.  用生理盐水将抗原稀释到2倍zui终浓度按小鼠每针次50μl、家兔每针次100μl用量配制。备注：使用的抗原用量为小鼠每针次10-20μg、家兔每针次20-50μg。

2.  用振荡器充分混匀佐剂，无菌条件下取出所需用量按小鼠每针次50μl、家兔每针次100μl与抗原按体积比1:1混合，并用振荡器剧烈振荡5-10min，直至静止放置10min水油相不分层。备注：与抗原混合前佐剂分层属正常现象，但必须充分混匀后才能取用。

3.  通过皮下或肌肉单点注射免0疫动物，小鼠每针次100μl，家兔每针次200μl。

1佐剂与抗原混合后应尽快注射，若放置时间较长出现水油相分层，则必须按上述步骤2重新振荡混匀；

2抽入针管前应摇匀，抽入针管后应尽快注射；

3尽量选择-淋巴0结附近如腋窝和腹0股0沟附近的皮下或肌肉进行免0疫。